Cum afectează puritatea apei rezultatele cromatografiei lichide de înaltă performanță?

Tocmai ați rulat o metodă de gradient care a funcționat perfect săptămâna trecută. Standardele de calibrare par curate, dar cromatograma eșantionului arată un vârf suplimentar la 23,8 minute. Înlocuiți coloana, pregătiți tampon proaspăt și verificați detectorul. Vârful este încă acolo. Apoi schimbi apa intrând în faza mobilă, iar artefactul dispare. Aceasta este realitatea cromatografiei lichide de înaltă performanță: puritatea apei se află sub fiecare separare și, atunci când se schimbă, metoda se schimbă odată cu ea.

Puritatea apei afectează calitatea datelor HPLC în patru moduri practice: stabilitatea liniei de bază, forma vârfului, reproductibilitatea retenției și durata de viață a instrumentului. Contaminanții implicați pot fi molecule organice, ioni dizolvați, particule sau microbi. Chiar și o cantitate mică dintr-un fel de impuritate poate produce consecințe disproporționate cu concentrația sa.

Efectele principale ale purității apei asupra HPLC

Într-un sistem HPLC, apa este un reactiv, nu un fundal pasiv. Acesta transportă tamponul, dizolvă proba și contribuie la fundalul detectorului. Prin urmare, impuritățile din apă se deplasează direct în semnalul analitic. Tabelul de mai jos rezumă cei mai comuni contaminanți și efectele acestora.

Aceste efecte nu sunt doar teoretice. Un biofilm microbian într-un rezervor de apă poate elibera metaboliți care absorb UV și, odată ce se formează filmul, pur și simplu înlocuirea apei poate să nu rezolve problema până când rezervorul este curățat și igienizat.

Ce înseamnă de fapt „HPLC-Grade” și apa de tip 1

Majoritatea metodelor analitice necesită apă care îndeplinește specificațiile de tip 1. În termeni practici, asta înseamnă că rezistivitatea la 25 de grade Celsius este de aproximativ 18,2 megaohm-centimetri, conductivitatea este aproape de 0,055 microsiemens pe centimetru și carbonul organic total este suficient de scăzut încât apa să nu creeze un fundal vizibil UV sau MS. Rezistivitatea singură nu este suficientă. De asemenea, trebuie să cunoașteți nivelul TOC, numărul de particule și, în unele aplicații, valorile silicaților sau sodiului.

pH-ul apei purificate nu este o specificație utilă. Apa ultrapură nu are aproape nicio capacitate de tamponare și absoarbe rapid dioxidul de carbon din aer, astfel încât un pH măsurat în jurul valorii de 5,6 reflectă pur și simplu CO2 dizolvat. pH-ul care contează este pH-ul fazei mobile tamponate pe care o pregătiți.

Cerințele de calitate a apei depind și de detector. Detectarea UV la 210 nm este deosebit de sensibilă la contaminarea organică, deoarece multe legături carbon-oxigen și carbon-azot absorb acolo. LC-MS are nevoie de apă cu impurități nevolatile foarte scăzute pentru a evita suprimarea ionilor și formarea de aduct. Detectoarele evaporative sunt afectate în mod similar de contaminarea nevolatilă, deoarece ridică semnalul de fundal. Apa de tip 1 este, prin urmare, un punct de plecare solid pentru aproape fiecare aplicație HPLC.

Apa îmbuteliată de calitate HPLC poate funcționa, dar trebuie depozitată și manipulată corect. Verificați certificatul de analiză, înregistrați numărul lotului și nu presupuneți niciodată că un container vechi este lipsit de creștere biologică.

Eluția cu gradient face vizibile impuritățile apei

Impuritățile apei sunt cele mai vizibile în metodele cu gradient. Într-o rulare izocratică, un contaminant care absoarbe UV poate pur și simplu ridica puțin linia de bază. Într-un gradient, fracția de apă începe ridicată, iar fracția de solvent organic crește în timp. Contaminanții pot fi reținuți la capul coloanei și apoi eluați pe măsură ce crește conținutul organic. Acest lucru produce vârfuri fantomă și o linie de bază în derivă care poate interfera cu integrarea și cuantificarea.

De aceea, un gradient gol este una dintre cele mai simple verificări pentru calitatea apei. Rulați gradientul exact fără a injecta o probă. Dacă în spațiul liber apar vârfuri, faza mobilă este suspectă.

Obiceiuri zilnice care protejează puritatea apei

Apa pură nu rămâne pură din întâmplare. Următoarele obiceiuri previn cele mai frecvente probleme în practica HPLC.

• Utilizați apă dintr-un sistem de purificare cu cartușe proaspete, o lampă UV funcțională și igienizare regulată.
• Colectați apa într-un recipient curat, cu capac. Nu lăsați containerul deschis în timp ce sistemul funcționează.
• Nu depozitați apă zile întregi. Pregătiți faza mobilă cu apă proaspătă în aceeași zi, ori de câte ori este posibil.
• Evitați adăugarea de apă proaspătă într-un rezervor parțial umplut. Înlocuiți conținutul rezervorului în loc să îl completați.
• Rulați un gradient gol la lungimea de undă utilizată pentru analiză și înregistrați rezultatul.
• Documentați rezistivitatea, TOC și data colectării apei în înregistrările dvs. analitice.

Pentru laboratoarele care folosesc apă îmbuteliată, se aplică aceleași reguli. Verificați data de expirare, închideți recipientul imediat după utilizare și nu returnați apa neutilizată dintr-un pahar în sticlă.

Aditivii Transformă o problemă de apă într-o problemă de metodă

Fazele mobile rareori contin doar apa. Sărurile tampon, acizii, reactivii perechi de ioni și unii modificatori specializați sunt adăugați la concentrații relativ scăzute. Dacă apa conține urme de impurități care absorb UV, este posibil ca aceste impurități să nu modifice capacitatea tampon, dar pot apărea în continuare în semnalul detectorului.

Lichidele ionice sunt uneori folosite ca modificatori de fază mobilă pentru a îmbunătăți forma vârfului sau selectivitatea. Când alegeți unul, ar trebui să se aplice același standard de puritate. De exemplu, tetrafluoroborat de 1-etil-3-metilimidazoliu este un lichid ionic comun pentru studii cromatografice. Ar trebui să fie dizolvat în apă care îndeplinește deja specificațiile de tip 1; în caz contrar, aditivul devine o altă sursă de contaminare. Dacă doriți să înțelegeți proprietățile legate de separare ale acestor compuși, nostru prezentare generală a modului în care lichidele ionice se comportă în procesele de separare acoperă variabilele practice.

CAS:143314-16-3 -1 - Furnizor de lichide cu tetrafluoroborat de etil-3-metilimidazoliu Tehnologia Ldet este China personalizat CAS: 143314-16-3 -1 -Etil-3-metilimidazolium Tetrafluoroborat Lichide furnizori și 1 -Etil-3-metilim... Vizualizare produs →

Puritatea începe cu furnizorul

La Zhejiang Ldet, producem lichide ionice și produse chimice de specialitate. Știm din producție că o urmă de impuritate într-o materie primă poate modifica performanța în aval. De aceea verificăm conținutul de apă, halogenurile reziduale și comportamentul UV înainte de eliberare. Aceeași disciplină aparține unui laborator HPLC: alegeți materiale care vin cu specificații documentate. De exemplu, tetrafluoroborat de 1-butil-3-metilimidazoliu este disponibil cu date de puritate care vă permit să evaluați dacă este compatibil cu metoda dvs. de detectare.

CAS: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolium tetrafluoroborat Furnizori de lichide Tehnologia Ldet este China personalizat CAS: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolium tetrafluoroborat furnizori de lichide și 1-Butil-3-metilimid... Vizualizare produs →

Ce să verificați pe un certificat de analiză

• Conținutul de halogenuri reziduale, deoarece halogenurile pot afecta separările schimbătoare de ioni și coroziunea.
• Conținutul de apă, deoarece apa modifică concentrația efectivă a aditivului.
• Un spectru UV sau o reducere UV, astfel încât să puteți prezice absorbanța de fundal.
• Consecvență lot la lot, pentru că un lot nou nu ar trebui să vă schimbe în tăcere metoda.

Dacă aveți nevoie de ajutor pentru potrivirea unui material cu o metodă, puteți discutați datele de puritate și cerințele personalizate cu echipa noastră tehnică .

Tratați apa ca parte a metodei

Puritatea apei în HPLC nu este o configurare unică. Este o variabilă zilnică care se poate modifica odată cu sezonul, sticla de depozitare și starea sistemului de purificare. Utilizați apă de tip 1, confirmați TOC și rezistivitatea, manipulați-o corect și alegeți aditivi cu trasabilitate. Într-o metodă construită pe nanograme de analit, apa nu este niciodată „doar apă”.